研究了黃原膠和鍵那綠B(JGB)結合的共振散射光譜.實驗結果表明，在pH 9 62水溶液中，黃原膠與染料
探針JGB發生靜電作用，產生了以328.5 nm為特征峰的共振光散射（RLS)光譜.此波長下，在一定黃原膠濃度范
圍內，增強的共振光散射強度（A/RLS)與其具有線性關系.據此建立了痕量黃原膠的共振光散射分析方法.當JGB
的濃度為2 2X 10-5 mol/L時，測定黃原膠的檢測限為12 24ng/mL.
黃原膠，又稱漢生膠，其結構如圖1所示，是野油菜黃單孢桿菌分泌的一種胞外酸性多糖，具有陰離 子屬性和良好的水溶液性[1].黃原膠在食品工業、精細化工、石油采礦、醫藥工業等領域有廣泛的應用.在 油田應用和實驗研究中，準確測定黃原膠十分重要.黃原膠的測定方法有苯酚-磺酸法、色譜法、放射性 標記法、有機碳含量測定法、沉淀法、粘度法、咔唑法等[2].這些方法有的費時，有的干擾大，有的測定靈 敏度低.本研究建立共振光散射(RLS)法測定黃原膠濃度.RLS方法具有操作簡單，靈敏度高的特點，已 廣泛地應用于生物大分子[3、金屬離子[4、鹵離子[5]、生化藥物[3、納米粒子[7]、表面活性劑[8]、細菌[9等 的檢測.
鍵那綠B(JGB)是一種陽離子型染料，可作為共振光散射探針，對核酸等生物大分子進行檢測|10.本 研究發現，在堿性條件下，醌亞胺類陽離子染料JGB和黃原膠通過靜電引力結合產生増強的共振光散射， 最大散射峰位于32& 5 nm處，且RLS増強程度與黃原膠濃度在一定范圍內呈線性關系.在此基礎上建立 了測定黃原膠的RLS方法.
1實驗部分
1. 1儀器和試劑
F2500型熒光分光光度計（日本日立公司)，UV 8500型紫外可見分光光度計(香港天美公司)，PHS 3C型酸度計(成都方舟科技開發公司)，MVS 1型漩渦混合器(北京北德科學器材有限公司）.
黃原膠溶液：稱取0. 050 0 g黃原膠固體粉末，溶解于二次蒸餾水中配制成濃度為200?/mL的儲備 液，取25. 00 mL稀釋至500i 0 mL,得10. 0 Mg/mL的工作液，置于冰箱中以備用.
JGB(上海第三化學試劑廠，上海)儲備液是直接將晶體溶于水配成，濃度為2 0X10-4mol/L;用Brit ton Robinson(BR)緩沖溶液來控制體系的酸度，用1. 0 mol/L的NaCl溶液調節溶液的離子強度.所用試 劑均為分析純；實驗中所用的水均為二次蒸餾水.
1.2實驗方法
在10 mL比色管內依次加入1. 0 mL pH 9. 62的BR緩沖溶液、一定量的黃原膠溶液、適量的染料溶 液，每加入一種試劑后用漩渦混合器混合均勻，最后用二次水稀釋定容至刻度線.在熒光分光光度計上以 同步掃描激發和發射單色器以獲得RLS光譜，于X(m=X(I=32& 5 nm處測定復合物的共振光散射 強度I和試劑的空白/。，A/=/- I。.激發和發射狹縫寬度均為5. 0 nm.
2結果與討論
2 1 JGB黃原膠體系的RLS光譜特征
圖2是試劑空白和JGB-黃原膠結合物的RLS光譜.由圖2可知，當JGB與黃原膠在溶液中單獨存在 的時候，其在220~ 600 nm的波長范圍內RLS信號均較弱(線1和線2)，但少量黃原膠加入后，JGB -黃原 膠體系的RLS信號増強，最大散射峰位于328. 5 nm,此外在455. 0 nm, 492 0 nm處均能得到増強信號. 在整個掃描范圍內，隨著黃原膠濃度的増加，RLS強度増加，表明帶正電的JGB于帶負電的黃原膠之間發 生了作用.由于黃原膠具有陰離子屬性，JGB帶正電荷，二者之間通過靜電作用，形成了復合物，產生了増 強的RLS.
22實驗條件的優化
2 2 1試劑加入順序的影響
試劑的加入順序對體系的影響較大，實驗表明采用BRxanthanJGB順序比較好，此時獲得的RLS強 度大且數值穩定.首先混合緩沖溶液和黃原膠，可以使黃原膠所帶的酸性基團在堿性的環境中更好的離 解増加了體系的有效電荷，容易與JGB形成締合物，獲得較強的RLS信號.
2 2 2 pH值的影響
圖3的pH影響反映了黃原膠與染料分子之間的靜電作用力的影響.帶負電荷的黃原膠與帶正電荷的 JGB二者在偏堿性環境下產生較強的RLS信號.如圖3所示，當pH = 9. 62左右時體系的RLS信號的増 強較大.在p：^ 9. 62時，JGB自身的RLS強度増大，說明自身發生了聚集，不利于其與黃原膠之間的反 應.如果pH<9. 62或酸度更低的環境下，黃原膠分子中的羧基和羥基上的負電荷被H+中和，與JGB的 結合程度受到削弱，體系的RLS強度降低.
圖3酸度對RLS的影響 Fig. 3 Dependence of the RLS intensity on pH
2 2 3 JGB濃度的影響
分別在一定含量的黃原膠溶液中加入不同濃度的JGB溶液.如圖4所示，當JGB濃度在1. 6X 10-5 ~ 2 45X10-5mol/L的范圍內，隨著JGB濃度的增加，A/較穩定，但當JGB濃度大于2. 45X10-5mol/L 時，隨著其濃度的增大，A/值減小.通常情況下，濃度為10-3~10-6mol/L的陽離子染料在溶液中有聚集 的特性，并且在該濃度范圍內，存在著染料單體與二聚體的動態平衡.溶液中離子型染料的聚集導致二聚 體甚至是高聚體的生成，從而直接影響到染料與其它物質的結合反應及光譜性質[11].由線2可以看出， 當JGB濃度低時，其RLS強度較小，說明主要以單體形式存在，隨著染料濃度的進一步增加，RLS強度急 劇增大，說明JGB自身聚合體數目逐漸增多，這與文獻10的結果是一致的.線1表示在黃原膠濃度一定的 情況下，隨著體系中JGB濃度的增大，體系的RLS的變化情況.當其濃度小于2. 45X10-5mol/L時，體 系的RLS強度隨染料濃度的增加而增加，JGB濃度繼續增大，則由于自身的聚集程度增加，且自身的吸收 能力增強，導致與黃原膠的反應減弱，體系的RLS的強度開始降低.
224離子強度的影響
JGB黃原膠之間是通過靜電引力結合的.由圖5可以看出，介質的離子強度的增大，即Na+濃度的增 大將使體系的△/值減小.原因可能是離子氛屏蔽了黃原膠基團上的電荷，使得其與JGB的結合效率減小，
從而降低體系的RLS強度.
2 2 5反應時間和穩定性
通過實驗優化條件發現，本實驗體系的反應時間為1~5 min體系的穩定時間為4 ~16h.
2 3共存物質的影響
試驗了包括金屬離子、糖類和蛋白質等物質對黃原膠測定的影響，結果見表1.在誤差為±5%的范圍 內，體系對金屬離子所能允許存在的最大濃度有較大差別，如對Pb2+ Cd2+，Zn2+等能容許存在的最大濃 度較小，而對Ca2+，Ba2+，Mg2+能容許存在的最大濃度則較大.乳糖Lac蛋白質，氨基酸允許的濃度較小.
表1共存物質的影響
Table 1 Effects of Coexists Substances
干擾物質共存物質的最大允許濃度（±5%) /10-6mol . L-1干擾物質共存物質的最大允許濃度（±5%) /10-6mol. L-1
Ca2 + Cl-4 200. 0Zn2+N〇3-10 0
Al3 + SO4-120. 5Na +Cl-1 500 0
Pb2，N〇3-5. 0Ba2 +Cl-240. 0
Cd^ Cl-10. 0NHlCl-60. 0
Mg2，S〇4-300. 0乳糖Lac3. 6
BSA *1. 0HSA *1.4
Glycin3. 0G lu cos e2. 0
注：黃原膠溶液濃度為1. 0Pg- mL-1，JGB濃度為2 2K10-5mol/L pH=9 62.
*單位為Pg. mL-1.
24標準曲線和合成樣的分析
在最佳的反應條件下，在328. 5 nm處測定復合物和試劑空白的RLS強度，以（IRLS值對黃原膠的濃 度進行線性擬合，其結果見表2.從表2可知，該方法能夠適用于對微量的黃原膠進行測定.表3是根據表 1所提供的物質的干擾狀況而合成的樣品5次平行測定所得的結果.分析數據令人滿意.
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